FACULTAD DE CIENCIAS
Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Bioquímica

Dr. Jorge Arévalo
Telef: 4821130 anexo 25
E-mail: jazz@upch.edu.pe

Líneas de investigación:

1. Polimorfismo genético de Leishmania.
2. Proteasas de Fasciola hepática.
3. Metabolismo de tripanosomátidos.

Proyectos:

Red Alfa de Parasitología: UCV (Venezuela), UPCH (Perú), UMSS (Bolivia), Univ. del Valle (Colombia), Universidad Nacional de Asunción (Paraguay), ULB, UCL, ITMA (Bélgica), Univesite de Paris (Francia), Univ. de Valencia (España).
Financiamiento: Comission of the European Communities.
Objetivo: Formación de recursos humanos en el área de parasitología mediante cursos, entrenamiento, post-grado.

MBRS at San Francisco State University.
Financiamiento: Minority Biomedical Research Support Program por el NIH.
Objetivo: Contacto de estudiantes americanos con una realidad en paises de América Latina.

"Efecto de la deficiencia de Vitamina A en la inmunidad a Leishmaniasis"
Financiamiento: CONCYTEC
Objetivo: Estudiar el efecto de la deficiencia deVitamina A en la inmunidad en ratones en el curso de la infección Leishmaniasis.

"A study of the molecular basis of chromosomal size variation in Leishmania peruviana with particular reference to pg 63 containing chromosomes".
Financiamiento: Commission of the European Communities.
Objetivo: Estudiar mecanismos de polimorfismo genético en cromosomas de diferentes Leishmanias de Peru.

"Clonal Variability Analysis of the Parasite as a predictive tool for different clinical manifestations in Leishmaniasis".
Financiamiento: Commision of the European Commnunities.
Objetivo: Buscar la vinculación entre el genotipo y el fenotipo (virulencia).

"Assesment of PCR as a predictive test for relapse in American Leishmaniasis".
Financiamiento: USAID

"Obtención de una vacuna sintética contra la leishmaniasis".
Financiamiento: CAF

"Purificación parcial de cisteinil proteinasas de Leishmania braziliensis y su uso en el diagnóstico".
Financia: OPS/CONCYTEC

"Cystein proteinases from Fasciola hepática adult worms as marker of fasciolasis in sheep".
Financia: TWAS
Cooperación:
University of Cambridge, Reino Unido. University of Alabama, Birmingham, U.S.A. CUMETROP, Cochabamba, Bolivia. University of Chicago. London School of Tropical Medicine and Hygiene, Reino Unido. Escola Paulista de Medicina, Sao Paolo, Brasil. Institute of Tropical Medicine Prince Leopold, Amberes, Belgica. University of British Columbia, Vancouver, Canada. CIDEIM, Cali, Colombia. ORSTOM, Montpellier, Francia. Technion-Israel Institute of Technology, Israel.
Publicaciones:
J.C. Dujardin, J.P. Dujardin, M. Tibayrenc, C. Timperman, S. DeDoncker, D. Jacket, J. Arévalo, A.LLanos-Cuentas, H. Guerra, H. Bermudez, R. Hamers and D. Le Ray. (1995). Karyotype plasticity in Neotropical Leismania: an index for measuring genomic distance among L.(V.) peruviana and L. (V.) braziliensis populations. Parasitology, 110:21-30.

K. Victoir, J.C. Dujardin, S. De Doncker, D.C. Barker,J. Arevalo, R. Hamers and D. Le Ray. (1995). Plasticity of gp63 gene organization in Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Viannia) peruviana. Parasitology, 111:265-273.

Resumen:
Se realizó el estudio de la organización genómica de los genes pg63 en 4 aislamientos de Leishmania braziliensis y 7 de L. peruviana, usando 3 enzimas de restricción (Bgl 1, Sal 1, y Apa 1) para el análisis de RFLPs. Los resultados mostraron un gran polimorfismo entre los aislamientos. Algunas características fueron específicas de L. braziliensis o de l. peruviana, y otras fueron específicas a las poblaciones biogeográficas correspondientes a L. peruviana. El promedio del mínimo número de copias del gen gp63 era mayor en L. braziliensis, lo cual sugiere que la deleción de genes gp63 podría estar parcialmente relacionado con la disminución del tamaño de los cromosomas que contienen dichos genes, en estas dos especies. Los resultados podrían sugerir la existencia de al menos dos arreglos de repeticiones heterólogas de gp63, variando en el número de copias presentes en cada una de estas especies. Se observó un rearreglo de genes gp63 durante el mantenimiento in vitro de un strain de referencia de L. braziliensis. Todas estas observaciones documentan la idea de una organización dinámica de los genes gp63 en L. braziliensis.

J.R. Espinoza, A.C. Skinner, C.R. Davies, A. Llanos- Cuentas, J. Arévalo, C. Dye, W.R. McMaster, J.W. Ajioka, J.M. Blackwell. (1995). Extensive polymorphism at the Gp63 locus in field isolates of Leishmania peruviana. Molecular and Biochemical Parasitology 72: 203-213.

Resumen:
Existe diversidad genética dentro y entre los arreglos de copias tandem de genes gp63 en los aislamientos de laboratorio de Leishmania spp; sin embargo, no se ha determinado hasta que punto esto representa una diversidad genética natural. En el presente artículo se analiza el locus Gp63 de 58 aislamientos recientes de L. peruviana, y de clones dirivados de estos. Se observó un gran polimorfismo para el locus Gp63, tanto en el tamaño de los cromosomas conteniendo genes gp63, como en el análisis de RFLPs. Todos los clones dentro de un mismo aislamiento son iguales. Para el estudio de FRLPs, se seleccionaron 3 enzimas: Pst1 que corta dentro de la región codificante, Sal1 corta en la región intergénica y, Eco R1 que corta fuera de complejo de genes gp63. Pst1 produjo patrones idénticos en todos los aislamientos/clones. Con Eco R1 y Sal1 se observó que todos los clones dentro de un aislamiento eran iguales, pero que los aislamientos eran polimórficos. Los patrones de restricción de Eco R1, analizados por pulsed-field gel electrophoresis, comprobaron la presencia de 2 agrupamientos (clusters) de genes Gp63 en cada cromosoma homólogo, uno de ellos conteniendo entre 3 y 10 copias del gen Gp63, y el segundo que podría contener 1 0 2 copias del gen. Mientras que los patrones de Sal1 mostraron diferentes sitios de restricción dentro de los clusters, pero no entre regiones intergénicas. El análisis de varianza de la frecuencia de alelos, indica una resistencia al flujo de genes a todo nivel.

J.C. Dujardin, A.L. Bañuls, K. Victoir, S. De Doncker, J. Arévalo, A. Llanos-Cuentas, M. Tibayrenc, D. Le Ray. (1995). From population to genome: ecogenetics of Leishmania (Viannia) braziliensis and L. (V.) peruviana. Annals of Tropical Medicine and Parasitology, Vol. 89, supplement No. 1, 45-53.

Resumen:
Se analizó el polimorfismo de tamaños de 9 cromosomas, reconocidos por sondas específicas, de poblaciones de Leishmania (Viannia) braziliensis y L. (V) peruviana provenientes de varias zonas biogeográficas de Peru. La interpretación del polimorfismo observado, condujo a la identificación de 5 cromosomas consistentes (alfa y beta tubulina), y 4 cromosomas variables. La acción del medio ambiente en la expresión de polimorfismo se indicaba por: 1)la diferenciación entre L. braziliensis (Selva) y L. peruviana (Andes) según el tamaño del cromosoma que contenía los genes gp63, y 2)el polimorfismo de cromosomas variables en L. peruviana, que revelaba una gran estructura eco-geográfica de poblaciones de parásitos, observándose mayor diferencia cromosomal según se va de norte a sur. Se piensa que el polimorfismo de cromosomas variables tiene un significado adaptativo debido a 1) una correlación entre el polimorfismo cromosomal y la variabilidad del fenotipo (tipo de lesión en pacientes, y virulencia in vitro); y 2) la asociación entre disminución de tamaño del cromosoma que contiene gp63 desde L. braziliensis hasta L. peruviana, y el rearreglo de genes gp63, probablemente acompañado de unadisminución en el número de copias. Como se ha observado que la variación cromosomal es debido principalmente a diferencias eco- geográficas más que a variación isoenzimática, la variación cromosomal y la variación enzimática probablemente difieren en su significado adaptativo.

J.C. Dujardin, A.L. Bañuls, A. Llanos-Cuentas, E. Alvarez, S. De Doncker, D. Jacket, D. Le Ray, J. Arévalo, M. Tibayrenc. (1995). Putative Leishmania hybrids in the Eastern Andean valley of Huanuco, Peru. Acta Tropica 59:293-307.

Resumen:
En 1990 se produjo una epidemia de leishmaniasis en el valle de Huanuco, en los Andes Orientales de Perú. Por razones ecológicas y geográficas se pensó en la coexistencia de leishmaniasis andina (uta) y leishmaniasis selvática, lo cual llevó a realizar un muestreo simpátrico. Los resultados de electroforesis de enzimas multilocus, de ampliación randomizada de DNA polimórfico y el cariotipaje molecular, identificaron 7 aislamientos de Leishmania en humanos. De estos, 3 aislamientos correspondían a L. braziliensis, y 4 constituían posibles híbridos entre L. braziliensis y L. peruviana. La información de Huánuco es comparada con resultados obtenidos de otras areas endémicas de uta. Además se discuten las implicancias biológicas y epidemiológicas.

M. Lopez, R. Inga, M. Cangalaya, J. Echevarría, A. Llanos-Cuentas, C. Orrego, J. Arevalo. (1993). Diagnosis of Leishmania using the polymerase chain reaction: a simplified procedure for field work. Am. J. Trop. Med. Hyg. 49(3):348-356.

Resumen:
Se obtuvo la amplificación enzimática de DNA del minicírculo del kinetoplasto de Leishmania usando oligonucleótidos dirigidos a este DNA, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se obtuvo un único producto de 70 pares de bases a partir de parásitos que pertenecian al complejo de L. braziliensis. El secuenciamiento del producto amplificado confirmaba su existencia en el minicírculo. Para PCR se usaron muestras de biopsia de la piel de pacientes humanos. Una incubación rápida de las muestras con deoxiribonuclease I, previamente a la reacción PCR, incrementaba la confianza en el ensayo. La disrupción del kinetoplasto por acción de nucleasas se pensaba que producía más copias de minicírculo accesibles a amplificación. Los resultados comparativos entre PCR y los métodos de detección parasitológicos convencionales, muestran una mejor sensibilidad del primero para fines de diagnóstico. Además, se adapta el protocolo de PCR para el diagnóstico de leishmaniasis, a condiciones mínimas de equipamiento y distantes de laboratorios centrales.

M. Lopez, Y. Montoya, M. Arana, F. Cruzalegui, J. Braga, A. Llanos-Cuentas, G. Romero, J. Arevalo. (1988). The use of nonradioactive DNA probes for the characterization of Leishmania isolates from Peru. Am. J. Trop. Med. Hyg. 38(2):308-314.

Resumen:
Se describen las condiciones para la hibridización dot blot de DNA usando sondas biotiniladas de kDNA de Leishmania. La sensibilidad y especificidad que se logra con sondas biotiniladas o marcadas con fósforo radioactivo son equivalentes. El mínimo nivel de detección obtenido fue de 100 parásitos adheridos a papel de nitrocelulosa (dot blot) y tratados con Proteinasa K. Los estudios se realizaron en 112 aislamientos de Leishmania de pacientes con uta y espundia, y se determinó que todos pertenecían al complejo de Leishmania braziliensis.

Laboratorio: Area: 250 m2 (2 salas)
Equipo: esencial para trabajos en Biología molecular.
Técnicas: anticuerpos monoclonales, extracción/purificación de DNA, purificación de proteínas, isoenzimas, fusión de protoplastos, transformación de células, sondas de DNA (RFLP/PCR), secuenciamiento de DNA, cultivo de tejidos, cultivo de células.

Investigadores estables: 8 (además de 1 técnico).

Departamento de Microbiología. Laboratorio de Biotecnología Ambiental

M.Sc. Jazmín Hurtado

Líneas de Investigación:

• Biotecnologías aplicadas a las industrias minera y petrolera:  Lixiviación bacteriana, Biodegradación de cianuro, Desarrollo de Wetlands, Bioabsorción y Bioremediación.

Proyectos:

"Lixiviación bacteriana de concentrados auríferos refractarios.  Financiación:  Minas Ocoña S.A"

"Aislamiento y caracterización de microorganismos mesófilos y termófilos aislados de pilas de lixiviación bacteriana de cobre.  Financiación:  Southern Peru Limited y Recursos Propios del laboratorio"

"Biodegradación de Cianuro.  Financiación: Consorcio Minero Horizonte y recursos propios del laboratorio"

"Aislamiento y caracterización de microorganismos presentes en petroleo y combustibles.  Financiación: PETROPERU"

Publicaciones:

- Hurtado, J.E., Yu-Li Tsai y O.H. Tuovinen (1987). Effect of oxyanions of sulfur on Thiobacillus ferrooxidans: ferrous iron oxidation, oxygen uptake and cytochrome reduction. Curr. Microbiol. 15:111- 113.

- Hurtado, J.E. (1993). Avances en biotratamientos de minerales y efluentes mineros. Acta de investigación Boletín de la Academia Nacional de Ciencia y Tecnología 1(1):36-39

- Hurtado, J.E., J.L. Bauer, H. Maldonado, E. Cruz y E. Lazcano. (1990). Arsenic solubilization in peruvian ores by T. ferrooxidans. Proceedings of the International Symposium on Dump and Underground leaching of metals. Leningrado, URSS. Karavaiko, G.I. and G. Rossi, eds. Centre for International Projects.

- Hurtado J. E.  (1999).  Alternativas ecologicas:  Biotecnologías al servicio de la industria minera.  Prensa Minera. (2): 34-36

- Hurtado J.E. (1997).  Biotecnologías aplicadas al drenaje ácdo.  Trabajos tecnicos del primer simposio Nacional de Medio Ambiente y seguridad Minera. Ed. Colegio de Ingenieros. Pp 97-100

- Hurtado J.E. (1999).  Tratamiento de aguas ácidas por wetlands.  Prensa Minera. (4):20-22

- Hurtado J.E., A. Berastain, J. Rivera, B. Ramos y D. Cornejo.  1996.  Trabajos Tecnicos del Primer Congreso Nacional de Minería. 90-92.

- Hurtado J.E. y A. Berastain. 1995.  Biochemical changes in Thiobacillus ferrooxidans growing in arsenopyrite.  Biohydrometallurgical processing.  Ed. T. Vargas, C.A. Jerez, J.V. Wiertz y H. Toledo.  Pp 109-112

- Hurtado J.E.  1999.  Biolixiviación de Concentrados Auríferos refractarios. Perú Minero. (14): 88-100.

Actividad Academica:

- Coordinadora de los cursos de pre-grado y post grado de Biotecnología, Microbiologia Ambiental, Biotecnología Ambiental y Metabolismo Microbiano de la Facultad de Ciencias de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

- Coordinadora de Cursos de Microbiología aplicada a la industria Minera en los centros Mineros: Southern Peru Limited (1993-1996-1997), Compañía de Minas Buenaventura (1996) y Cía de Minas Poderosa (1997).

- Coordinadora de los cursos: Mineria, Biotecnología y Medio Ambiente (1995), Introducción a la Biotecnología (1996) y Biotecnología para Ingenieros (1997).

- Coordinadora del Proyecto de Segunda Especialización en Biotecnología (Universidad Peruana Cayetano Heredia). Coordinadora de la Segunda Especialización en Biotecnología.

- Representante del departamento  de Microbiología al Proyecto de Segunda Especiacilización en Biohidrometalurgia(TECSUP-UPCH) 

Laboratorio:

Extensión: 70 m2
Equipo: Esencial para trabajos en Microbiología, columnas de lixiviación, electroforesis.
Técnicas: Extracción/purificación de DNA, purificación de proteínas, mutagénesis, fusión de protoplastos, transformación de células, sondas de DNA (RFLP/PCR), cultivo de tejidos, fermentación sumergida, inmovilización de células/enzimas, procesos continuos, control de procesos.

Investigadores estables: 2

Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio Afiliado

Dr. Ramiro Castro De La Mata
Línea de desarrollo: Screening farmacológico y toxicológico de productos animales y vegetales.

 
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