ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ABSCÍSICO MEDIANTE LA TÉCNICA DE ELISA COMPETITIVO

STANDARDIZATION OF A PROTOCOL FOR ABSCISIC ACID QUANTIFICATION THROUGH THE COMPETITIVE ELISA TECHNIQUE

                  Lucía Huánuco[1], Raymundo Gutiérrez[2] y Giovanna Müller[3]

 Resumen

La respuesta fisiológica más resaltante de las plantas frente al estrés hídrico por sequía es la síntesis de la fitohormona Acido abscísico (ABA). Una solución a los cambios ambientales es lograr un mejor uso eficiente de agua, por ello la predicción en la magnitud de la señalización de ABA puede tener gran importancia en la agroecología; además, permitirá la optimización de las técnicas de riego en zonas áridas que necesitan de cultivos que limiten el uso de éste recurso natural. Hasta el momento, la metodología más específica y confiable para su cuantificación es el Ensayo de Inmuno-absorbancia Ligado a Enzimas (ELISA por sus siglas en inglés) del tipo competitivo indirecto. Es por esta razón que el presente estudio utilizó esta técnica con la finalidad de establecer un protocolo reproducible y accesible que permita determinar concentraciones de ABA. La metodología consistió en evaluar diferentes concentraciones de los anticuerpos y antígeno, así como del sustrato; siendo las condiciones óptimas que permitieron obtener la mejor sensibilidad y reproducibilidad del protocolo las especificadas a continuación: cobertura con el conjugado ABA-BSA 300 ng/ml, MAC 252 (anticuerpo monoclonal específico para ABA) a 1:80 000, Antirat IgG a 1:2 000 y sustrato PNPP en 1 mg/ml. Obteniéndose al final ecuaciones lineales cuyos valores de R² se presentaron en un rango de 0.95-0.99 así como diferencias significativas entre los controles positivos y negativos.

Palabras clave: Estrés hídrico, acido abscísico (ABA), Ensayo de Inmuno absorbancia Ligado a Enzimas (ELISA), MAC 252, agroecología.

Abstract

The most highlighted physiological response of plants to water stress by drought is the synthesis of the plant hormone Abscisic Acid (ABA). A solution to environmental changes is to achieve a better efficient use of water. For this reason, predicting the magnitude of ABA signaling may have considerable importance in agroecology; in addition, will allow the optimization of irrigation techniques in arid zones that need crops that limit the use of this natural resource. The most specific and reliable methodology for quantification of the enzyme is the indirect competitive type Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). For this reason the present study used this technique in order to establish a reproducible and accessible protocol that determines concentrations of ABA. The methodology included the evaluation of different antibodies, antigen and media concentrations. Results show that optimal conditions that allowed the highest sensitivity and reproducibility are: converage ABA-BSA conjugate 300 ng / ml, MAC 252 (monoclonal antibody specific for ABA) to 1:80 000, antirat IgG 1: 2000 and PNPP substrate in 1 mg / ml. Linear equations obtained gave R2 values  in a range of 0.95-0.99 as well as significant differences between the positive and negative controls.

Key words: water stress, drought, abscisic acid (ABA), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), MAC 252, agroecology.

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[1] Centro Internacional de la papa, La Molina, Lima, Perú. lucianohely@gmail.com.

[2] Centro Internacional de la papa, La Molina, Lima, Perú. raymundo.gutierrez.r@gmail.com.

[3] Centro Internacional de la papa, La Molina, Lima, Perú. g.muller@cgiar.org.