CONCLUSIONES
  1. El pre-cultivo de yemas apicales de camote por 24 horas, en medio de cultivo rico en sacarosa (0.1 a 0.4M),  previa a la crioprotección y congelamiento vía el método de vitrificación en la gota pequeña de PVS2,   mejora significativamente la respuesta de rebrotamiento de las yemas (PRA)  en la etapa de post-descongelamiento, estableciéndose  la mejor respuesta media con una concentración de  0.35M de sacarosa.
  2. El tiempo de crioprotección con PVS2 tiene un efecto significativo sobre el potencial de recuperación de los ápices posterior al descongelamiento. Tiempos medios de crioprotección con PVS2 de 30 y 45 minutos mostraron resultados significativamente mejores que una crioprotección corta de 15 minutos o prolongada de 60 minutos.
  3. La comprobación del método mejorado de crioprotección (pre-cultivo con 0.35M de sacarosa, crioprotección por 30 minutos con PVS2) con un grupo de 24 genotipos reveló que el método tiene el potencial para ser aplicado sobre un rango amplio de genotipos; todos los genotipos mostraron rebrotamiento yel87.5% de ellos mostraron PRAsde 16 a 66%.
  4. Observándose en todos los ensayos coeficientes de correlación de Pearson altos entre PSA y PRA (de 0.95 a 0.99), y siendo el rebrotamiento de las yemas congeladas (PRA) la variable más importante, puede posiblemente obviarse la evaluación de sobrevivencia (PSA) en investigaciones futuras.

 

RECOMENDACIONES
  • Aunque pudo establecerse un rango aproximado de respuesta óptima de PVS2 (30 - 45 minutos) debería comprobarse el efecto de PVS2 en intervalos más cortos (p.ej. 5 minutos) con un mayor rango de genotipos (p.ej. mayor a 20).
  • En algunos tratamientos se observaron errores estándar altos. Aunque se utilizaron yemas apicales de plantas de la misma edad y tamaño, debería realizarse ensayos con yemas apicales más pequeñas (menos primoridios foliares) y de mayor número (p.ej.200 yemas/entrada) con el fin de reducir el error estándar.
  • Se recomienda comprobar el efecto de PVS2 y LS en conjunto, en combinación con una etapa de pre-cultivo en medio de cultivo rico en sacarosa (p.ej. 0.35M), utilizando en lo posible un  grupo mediano de genotipos (p.ej. seis)
  • Se utilizó como medio de post-descongelamiento el medio para el cultivo de  meristemos de camote desarrollado en el Centro Internacional de la Papa (CIP). Es probable que las necesidades nutricionales y hormonales de ápices crioprotegidos, congelados (- 196 °C) y descongelados son distintos a meristemos comunes. Se recomienda evaluar el efecto de retiro de NH4NO3del medio de post-descongelamiento en la primera etapa de recuperación (p.ej. 5 días).
  • Sería interesante evaluar el efecto del tamaño de yemas (número de promordios foliares), la edad de la planta madre (plantas más jóvenes, p.ej. 2 semanas de edad), pre-condicionamiento de la planta madre (luz, temperatura), pre-cultivo alternativo (prolina, trehalosa, etc.), y tratamiento con antioxidantes en la etapa de post-descongelamiento.
  • Se recomienda realizar un tamizado con un grupo más grande de genotipos (p.ej. colección núcleo de camote: ± 600 accesiones).
  • Implementación de un protocolo de criopreservación rutinario para colecciones grandes de camote.
  • La realización de estudios básicos al nivel celular (p.ej microscopía electrónica de ultra-estructuras, análisis diferencial de escaneo de calor [DSC], etc.) puede ayudar para acumular información valiosa para investigaciones futuras.